ПЦР (Полимеразная цепная реакция) – это способ диагностики ДНК и РНК возбудителя в лабораторных условиях. Впервые был введен американцем Кэри Муллисом порядка 50 лет назад.
ПЦР анализ отличается высокой чувствительностью, поскольку предоставляет возможность обнаружить возбудителя гепатита всего по одной молекуле, выявленной в биологической жидкости или коже.
Что такое ПЦР диагностика при гепатите
Сущность диагностики состоит в том, что частицу вируса принуждают размножаться in vitro (в пробирке) путем создания определенных условий и с применением специальных ферментативных веществ. ПЦР позволяет провести генотипирование возбудителя гепатита С. Это обеспечивает эффективность терапии, поскольку различные штаммы вируса неодинаково реагируют на противовирусные лекарственные средства.
Существует 2 вида ПЦР анализов на гепатит:
- качественный,
- количественный.
Проводимое лечение противовирусными препаратами следует систематически контролировать, так как иногда возникает необходимость корректировки терапии. С этой целью выполняют ПЦР диагностику.
Качественное и количественное исследование
- В первом случае выявляют в крови больного возбудителя и устанавливают его генотип. Генотипирование нужно для правильной диагностики, прогноза болезни и выбора тактики лечения.
- Если вирус гепатита С методом ПЦР в крови обнаружен, проводится количественное исследование. Последнее помогает высчитать количество молекул РНК возбудителя, находящихся в биологической жидкости пациента.
Подготовка к ПЦР диагностике гепатита
Для осуществления процедуры берут кровь из вены. Это лучше выполнять утром натощак.
Больному необходимо правильно подготовиться к ПЦР анализу на гепатит С:
- За 10 часов до манипуляции исключить прием пищи, допускается употреблять чистую воду.
- За день до процедуры исключить прием алкогольных напитков, за 4 часа до анализа не курить.
- Перед исследованием не подвергаться физическим нагрузкам и эмоциональным потрясениям.
- За 2 дня до взятия крови для проведения ПЦР на гепатит С перестать принимать лекарственные препараты. Если данное условие не выполняется, следует поставить в известность лаборанта, поскольку употребление некоторых лекарств приводит к ошибочно положительному результату исследования.
ПЦР на гепатит С
Положительный ПЦР анализ на гепатит С свидетельствует о неустанном размножении возбудителя и повреждении гепатоцитов.
Последующую количественную ПЦР диагностику гепатита С измеряют в МЕ/мл, или в копиях/мл. Это значит, какое количество копий РНК возбудителя гепатита С определенного генотипа выявлено в 1 мл крови.
Уровнем вирусной нагрузки определяется содержание РНК возбудителя в биологической жидкости пациента. У здорового человека результат ПЦР на гепатит С – отрицательный. Это говорит о том, что в крови исследуемого возбудитель выявлен не был.
Ниже в таблице представлена расшифровка количественного исследования на гепатит С методом ПЦР:
Вирусная нагрузка (содержание вируса в копиях/мл) | Оценка нагрузки | Характер репликации возбудителя |
103 и меньше | Крайне низкая | Неактивная |
104 105 | Низкая | Как правило, неактивная |
106 | Средняя | Активная |
107 | Высокая | Очень активная |
- Низкая вирусная нагрузка свидетельствует о том, что лечение выбрано правильно, и исход болезни – благоприятный.
- Большая концентрация возбудителя говорит об остром заболевании. Пациент заразен для окружающих.
- Средние показатели вирусной нагрузки свидетельство хронического гепатита. Они могут изменяться в сторону и увеличения, и уменьшения.
Количественное исследование методом ПЦР больному с гепатитом С выполняют на протяжении всего противовирусного лечения: через 1 месяц, 3 и 6 месяцев.
По окончании терапии назначают контрольную ПЦР диагностику.
ПЦР на гепатит B
ПЦР на гепатит B выполняют с целью выявления ДНК возбудителя.
Содержание ДНК определяют в копиях/мл или МЕ/мл. Результат исследования оценивают следующим образом:
- <, 2х10, говорит о том, что острая стадия не перейдет в хроническую,
- от 2х104 до 2х106 – в 30% случаев имеет место хронизация процесса,
- >,2х106 – в 95% случаев процесс будет хроническим.
Количественная ПЦР диагностика – основной способ определения обострения заболевания, обнаружения латентного носительства инфекции.
Расшифровка ПЦР диагностики
Качественное исследование может быть:
- положительным,
- отрицательным.
Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии вируса гепатита в крови.
Положительный анализ говорит о выявлении РНК возбудителя определенного штамма.
Достоверность ПЦР анализа на гепатит составляет 95%. 5% —ошибка из-за халатности персонала. Такое случается вследствие повышенных требований к выполнению анализа:
- соблюдение определенных условий хранения реактивов,
- высокая квалификация медицинских работников,
- чистота взятого материала.
Сам анализ характеризуется 100% диагностической точностью.
Количественное ПЦР исследование на гепатит дает возможность оценить вирусную нагрузку на организм. Анализ позволяет:
- уточнить стадию болезни,
- узнать эффективность противовирусной терапии,
- определить необходимость проведения биопсии печени.
Иногда пациент не ощущает себя заболевшим, а ПЦР анализ выявляет инфицирование. Это говорит о ранней стадии болезни или хронической форме. Для точной диагностики следует провести дополнительные исследования и начать адекватную противовирусную терапию.
Государственные учреждения выполняют анализ на бесплатной основе. Достаточно направления от врача-инфекциониста или гепатолога.
Платно исследование делают во всех больших городах нашей страны. Цену определяют тип исследования, имеющееся оборудование, время, затраченное на анализ.
- Качественная ПЦР диагностика в Москве и Санкт-Петербурге будет стоить 600-900 руб. В области –300-800 руб.
- Количественный ПЦР анализ на гепатит С обойдется в 17000-22000 руб., на гепатит В 1200-10000 руб.
Преимущества и недостатки исследования
Основными достоинствами ПЦР диагностики становятся:
- Широкий диапазон использования. Применяя стандартное оборудование, можно выявить любой вирус.
- Точность обнаружения вируса. Используя разные сочетания ферментов и технику выполнения анализа, получают 100% спецификацию анализа для нужного возбудителя.
- Высокая чувствительность. Данным методом обнаруживается в крови даже одна молекула возбудителя.
- Быстрота. На качественный анализ уходит несколько часов, количественный готов через пару суток.
- Определение возбудителя в инкубационном периоде. ПЦР выявляет вирус гепатита С не по наличию иммуноглобулинов, когда уже сформировался иммунный ответ, а до развития патологической реакции, что облегчает терапию.
Недостатки ПЦР диагностики становятся следствием ее преимуществ:
- необходима высокая степень чистоты, в том числе, лабораторного воздуха, чтобы другие РНК не проникли в образец,
- повышенные требования к медицинскому персоналу.
Результаты оценивает специалист, способный отличить подлинный анализ от ошибочно положительного (когда терапия завершена, а в крови остался нежизнеспособный возбудитель). Встречаются ложноотрицательные анализы (при клинической картине возбудителя не находят).